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細胞株的不同轉染方式有何區(qū)別?

原載自:www.85t3.com[行情動態(tài)]  2022-09-12  瀏覽次數:1115

   細胞株的轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技能。隨著基因與蛋白功用研討的深化,轉染目前已成為試驗室工作中常常涉及的根本辦法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過物理辦法將基因導入細胞的范例;化學介導辦法許多,如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染辦法、和多種陽離子物質介導的技能;生物介導辦法,有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技能。
  細胞株轉染時的瞬轉和穩(wěn)轉區(qū)別是什么?
  瞬轉即瞬時轉染,是指將外源質粒通過某種方式導入到細胞內得以表達;
  穩(wěn)轉即病毒感染,是利用慢病毒將外源插入整合到宿主細胞的基因組,從而達到持久性表達。
  由此可見,二者的區(qū)別即:
  穩(wěn)轉是基因組整合到宿主細胞基因組,跟隨細胞一起增值得以穩(wěn)定遺傳;
  瞬轉是質粒游離在細胞內,一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,但不能穩(wěn)定遺傳。
  細胞株進行轉染時轉染試劑的準備:
  1.將400ul去核酸酶水參加管中,震動10秒鐘,溶解脂狀物。
  2.震動后將試劑放在-20℃保存,使用前還需震動。
  3.挑選適宜的混合比例(1:1-1:2/脂質體體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中參加適宜體積的無血清培育基。
  4.將混合液在室溫放置10-15分鐘。
  5.吸去培育板中的培育基,用PBS或者無血清培育基清洗一次。
  6.加混合液,將細胞放回培育箱中培育一個小時。
  7.到時后,依據細胞品種決議是否移除混合液,之后參加*培育基持續(xù)培育24-48小時。

 

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